引物加了保护碱基和酶切位点（共14个碱基）后退火温度需要调整吗?
更新时间：2026-10-01 15:52:29
问题描述:
引物加了保护碱基和酶切位点（共14个碱基）后退火温度需要调整吗?
李小文回答:
引物的3’端要与模板严格配对,而5’端碱基没有严格的限制,只要与模板DNA结合的部分足够长,其5’端碱基可不与模板DNA配对而呈游离状态,这样,我们可以在引物的5末端加上酶切位点,因此退火温度依然取决于之前引物的退火温度.
引物加了保护碱基和酶切位点（共14个碱基）后退火温度需要调整吗?
引物的3’端要与模板严格配对,而5’端碱基没有严格的限制,只要与模板DNA结合的部分足够长,其5’端碱基可不与模板DNA配对而呈游离状态,这样,我们可以在引物的5末端加上酶切位点,因此退火温度依然取决于之前引物的退火温度.